Immunoadsorption av humant Immunoglobulin G med hjälp av Globaffin respektive Triazin-baserade ligander
2025 (Swedish)Independent thesis Basic level (degree of Bachelor), 10 credits / 15 HE credits
Student thesisAlternative title
Immunoadsorption of human Immunoglobulin G using Globaffin and Triazine-based ligands. (English)
Abstract [sv]
Immunoglobuliner (Ig) är en del av det adaptiva immunförsvaret. De delas in i olika isotyper med olika effektorfunktioner och binder till antigener i blod och kroppsvätskor för att eliminera dem. Immunoadsorption (IA) är en teknik som används vid exempelvis autoimmuna sjukdomar. Olika typer av ligander binder antikropparna och Ig-fritt plasma återförs därefter till patienten. Globaffinkolonnen innehåller peptidligander och används kliniskt för att rena upp IgG från plasma. Den har även visat sig kunna binda IgA och IgM. Triazinbaserade ligander har en grundstruktur som består av en bensenring med tre kväveatomer. I studien jämfördes Globaffin och ett Triazinderivat CAES-6B-Cl@R1=MAF, R2=MAF som i en tidigare studie har visat sig ha en bindningskapacitet på 28 mg IgG/ml agaroskulor. Syftet var att se om Triazinderivatet kan vara ett alternativ till Globaffin behandlingsmässigt. Det råder kunskapsluckor i adsorptions och desorptionsfaserna av humant IgG och tidigare studier har rekommenderat byte av matris för att öka bindningskapaciteten, därav användes akrylatkulor istället. För att undersöka detta tillsattes spädd plasma i spinnkolonner, tvätt och eluering utfördes och fraktioner samlades upp. Vidare utfördes SDS-PAGE, IgG Total och IgG Subklass ELISA på fraktionerna. Resultatet blev att kolonnerna hade bundit in 97% respektive 98% av mängden IgG som tillsattes. Trots de goda bindingskapaciteterna eluerade globaffinkolonnen 0,533±0,042% av bundet IgG och Triazinkolonnen eluerade 0,277±0,032%. Båda kolonner kunde binda alla fyra subklasser av IgG. Till kommande studier rekommenderas att variera pH på elueringsbufferten och att köra ELISA på andra isotyper.
Abstract [en]
Immunoglobulins (Ig) are part of the adaptive immune system. They are divided into different isotypes with different effector functions and bind to antigens in blood and body fluids to eliminate them. Immunoadsorption (IA) is a technique used in autoimmune diseases, for example. Different types of ligands bind the antibodies and Ig-free plasma is then returned to the patient. The Globaffin column contains peptide ligands and is used clinically to purify IgG from plasma. It has also been shown to bind IgA and IgM. Triazine-based ligands have a basic structure consisting of a benzene ring with three nitrogen atoms. The study compared Globaffin and a triazine derivative CAES-6B-Cl@R1=MAF, R2=MAF, which in a previous study has been shown to have a binding capacity of 28 mg IgG/ml agarose beads. The aim was to see whether the triazine derivative could be an alternative to Globaffin in terms of treatment. There are gaps in knowledge in the adsorption and desorption phases of human IgG and previous studies have recommended changing the matrix to increase the binding capacity, therefore acrylate beads were used instead. To investigate this, diluted plasma was added to spin columns, washing and elution were performed and fractions were collected. Furthermore, SDS-PAGE, IgG Total and IgG Subclass ELISA were performed on the fractions. The result was that the columns had bound 97% and 98% of the amount of IgG that was added. Despite the good binding capacities, the Globaffin column eluted 0.533±0.042% of bound IgG and the Triazine column eluted 0.277±0.032%. Both columns were able to bind all four subclasses of IgG. For future studies, it is recommended to vary the pH of the elution buffer and to run ELISA on other isotypes.
Place, publisher, year, edition, pages
2025. , p. 24
Keywords [en]
Affinity chromatography, Globaffin, Immunoadsorption, Immunoglobulin G, Triazine-based affinity ligand.
Keywords [sv]
Affinitetskromatografi, Globaffin, Immunoadsorption, Immunoglobulin G, Triazin-baserad affinitetsligand.
National Category
Medical and Health Sciences
Identifiers
URN: urn:nbn:se:mau:diva-78516OAI: oai:DiVA.org:mau-78516DiVA, id: diva2:1981224
Educational program
HS Biomedicinsk laboratorievetenskap
Presentation
2025-06-03, Malmö universitet, Fakulteten för Hälsa och Samhälle, Allmänna sjukhuset., Jan Waldenströmsgata 25, Malmö, 17:15 (Swedish)
Supervisors
Examiners
2025-08-042025-07-032025-08-04Bibliographically approved