Enterohemorragisk Escherichia coli (EHEC) är en gramnegativ bakterie och tarmpatogen som kan orsaka livshotande komplikationer som hemolytiskt uremiskt syndrom (HUS). En stor virulensfaktor med förmåga att orsaka sjukdom hos EHEC är produktionen av Shigatoxin 1 och 2 (Stx1 och Stx2). Under senare år har allt fler subtyper av respektive Stx1 och Stx2 rapporterats med kopplingar till allvarliga sjukdomar. Syftet med studien var att skapa ett nytt In-house PCR-protokoll för verifiering av EHEC-kolonier, med avseende på förekomst av stx1 och stx2. I studien inkluderades referensstammen E. coli D2154 (positiv för stx1 och stx2) och stam positiv för stx2f. Optimering av protokollet utfördes med både konventionell och realtids-PCR. Vid utformning av multiplex realtids-PCR användes probkoncentrationen 0,1 µM med en primerkoncentration på 0,3 µM för stx1 och probkoncentrationen 0,2 µM med en primerkoncentration på 0,5 µM för stx2. Det nya protokollet validerades genom att testa sparat material från 42 faecesprover, som tidigare utvärderats både på laboratoriet och ett referenslaboratorium. Effektiviteten av det nya protokollet beräknades till 91 % för stx1 och 95 % för stx2. Det nya protokollet fick en specificitet på 56 – 100 % och en sensitivitet på 88 – 100 % i förhållande till referenslaboratoriet. Det nya protokollet kunde detektera stx2f i prov som påvisats negativa på referenslaboratoriet, vilket var orsaken till många falskt positiva resultat och låg specificitet. Det nya protokollets förmåga att detektera stx1 och stx2 i EHEC-kolonier är övertygande, med en sensitivitet och specificitet på 100 %. Detsamma gäller för protokollets förmåga att detektera subtypen stx2f. Därmed kommer det nya protokollet att så småningom, efter ytterligare optimering, att implementeras och ersätta det befintliga protokollet på Klinisk Mikrobiologi i Lund.