Vankomycinresistenta enterokocker (VRE) omfattar stammar av Enterococcus faecalis och Enterococcus faecium som förvärvat van-A och/eller B-operon och därmed resistens mot antibiotikumet vankomycin. Utbrott av VRE sker främst inom sjukvården och kan orsaka svårbehandlade infektioner hos riskpatienter. Vankomycin utgör ibland det enda behandlingsalternativ. Sverige har en gynnsam situation mot flera andra länder eftersom en lägre andel av enterokock-infektionerna orsakas av VRE. Studiens syfte var att möjliggöra flytt av PCR-screening av VRE från Biorad CFX96 till en egenutvecklad metod i Panther fusion för att uppnå kortare svarstider och därmed ökad patientsäkerhet. En multiplex-realtids-PCR inriktad på generna vanA och -B utformades där tre olika duplex-PCR-mixar användes. Flytt till Panther fusion krävde att någon av mixarna uppnådde likvärdig eller högre specificitet och sensitivitet än nuvarande metod. Huvudmaterial i studien utgjordes av kontrollstammar av vanA-positiva E. faecium och -B1-positiva E. faecalis. Även 14 enterokock- och ytterligare 18 isolat av varierande bakterie- och parasitarter användes. Alla dessa utgjordes av både VRE-positiva och -negativa stammar. Även vanB2 och -3 (subtyper till vanB1) användes. Alla PCR-mixar klarade av att detektera båda vanA och -B1 generna hos kontrollstammarna i Panther fusion. Den analytiska specificiteten var sämre än nuvarande VRE-screeningmetod vilket visades genom att arter bakterie- och parasitarter negativa för van-operon var positiva. Den analytiska sensitiviteten för vanA uppmättes till 1800- och vanB till 180 CFU/ml i Panther fusion. Jämförelse mellan metodens sensitivitet och specificitet med nuvarande metods ansågs överflödig innan specificiteten har förbättrats. Metoden klarade väl av att detektera alla tre subtyper av vanB med Panther fusion. Fler optimeringsförsök kommer behövas för att höja både analytisk-sensitivitet och -specificitet innan överföring av VRE-analys till Panther fusion kan bli aktuellt.

Vancomycin-resistant enterococcus (VRE) comprises species of Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium that have acquired the vanA and/or vanB operon and thus resistance for the antibiotic vancomycin. Outbreaks of VRE primarily occurs in health care facilities where it can cause severe infections among patients at risk. Sometimes vancomycin constitutes the only therapeutic option. Sweden has a more favourable situation than many other countries as VRE consists of a lower proportion of all enterococcal infections. The aim of the study was to transfer the PCR-screening of VRE from Biorad CFX96 to an own-developed method in Panther fusion to achieve shorter response time to set a diagnosis to increase the patient safety. A multiplex-real-time-PCR targeting the vanA and -B genes was designed in the project where in total three duplex-PCR-mixes were used. Equal or higher specificity and sensitivity compared to the current method from any of the mixes were prerequisites for the transfer of the VRE-screening to Panther fusion. Main material in the study consisted of control spieces of vanA-positive E. faecium and vanB1-positive E. faecalis. Moreover 14 enterococcal sp. and a variety of 18 bacterial- and parasitic -species were used, all consisting of vanA/B-positive and negative species. Also, vanB2 and -3 (subtypes of vanB1) were used. All PCR-mixes managed to detect both the vanA and -B1 genes from the control species in Panther fusion. The analytical specificity was inferior to the current VRE-screening method which was seen by bacterial- and parasite species negative for van-operon showed positive. The analytical sensitivity was measured 1800 CFU/ml for vanA and 180 CFU/ml for vanB in Panther fusion. Comparison between the method’s sensitivity and sensitivity with the current one was deemed unnecessary until the specificity has improved. The method successfully managed to detect all three subtypes of vanB in Panther fusion. More optimization-experiments will be needed to increase both the analytical- sensitivity and -specificity before transfer of the VRE-screening to Panther fusion will be implemented.