B-cell kronisk lymfatisk leukemis (B-KLL) sjukdomsförlopp är i stor utsträckning heterogen, många patienter kan leva i flera år utan någon behandling medan andra snabbt insjuknar. Prognostiska faktorer som identifierar de som behöver behandling kort efter diagnos har ett stort kliniskt värde. Zeta-kedje-associerat proteinkinas 70 kDa (ZAP70), normalt uttryckt i T-celler har nyligen setts uttryckas av B-celler i B-KLL och det ses även en korrelation mellan fosforylering av ZAP70 i dessa patienter och dålig prognos. Analysering av fosfopeptider är en utmanande uppgift och den låga mängden av proteinerna kan kräva anrikning före analys med masspectrometri. Begränsningar i nuvarande anriktningstekniker har lett till att forskare letar efter alternativa metoder för berikning av fosfopeptider. Arbetet som presenteras i denna avhandling fokuserar på utveckling och karaktärisering av fospeptidanrikning med molekylärt präglade polymerer (MIP) specifika mot fosforylerad tyrosin. Syntetiserade under höga utspädnings förhållande, med användning av Fmoc-tyrosin-fosfotyrosin-etylester eller Fmoc-tyrosin-tyrosin-etylester med en urea- baserad funktionell monomer. Bindning av polymererna jämfördes under olika betingelser och utvärderades med HPLC (High Performance Liquid Chromatography) och Matrix-Assisted Laser Desorption / Ionization Time-of-Flight (MALDI-TOF). MIPs som erhölls i denna avhandling hade jämförbar bindnings prestanda mot den traditionella MIP-syntesen och visade selektivitet för fosfotyrosin och fosfoserin. Vidare när MIPs jämfördes med icke-imprintade polymererna (NIP) sågs det en signifikant mindre bindnings förmåga till de fosforylerade peptider i karbonatbuffert pH 7,4.

The clinical progression of B-cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) is largely heterogeneous; many patients live several years without any treatment while others rapidly fall ill. Prognostic factors identifying the patients who need therapy soon after diagnosis is of great clinical value. Zeta-Chain Associated Protein kinase 70 kDa (ZAP70) generally expressed in T-cells have recently been seen in B-cells of patients with B-CLL, and there is a correlation between phosphorylation of ZAP70 and a poor prognosis. Analyzing phosphoproteins is a challenging task; the low abundance of the proteins may require enrichment prior to mass spectrometry analysis. Limitations in current enrichment techniques lead to researchers looking for alternative methods for enrichment of phosphoproteins. The work presented in this thesis focused on the development and characterization of phosphopeptide enrichment using high dilution molecular imprinted polymers (MIP) targeting phosphorylated tyrosine, using Fmoc-tyrosine-phosphotyrosine-ethyl ester or Fmoc-tyrosine-tyrosine-ethyl ester with a urea-based functional monomer. Binding of the polymers was compared in different conditions and evaluated with High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) and Matrix-assisted laser desorption/ionization Time-of-flight (MALDI-TOF). MIPs obtained in this thesis had binding performance similar to the traditional synthesis and showed selectivity for phosphotyrosine and phosphoserine. Moreover, when comparing the MIPs with the non imprinted polymers (NIP), the NIP showed significantly less binding to the phosphorylated peptide in carbonate buffer pH 7.4.